产品名称：K562耐阿霉素细胞株

服务流程： 

（1）客户提供：目的细胞具体信息；

（2）操作过程：细胞复苏培养，细胞发货；

（3）交付内容：细胞系/细胞株，以及细胞使用说明书。

英文简称：K562/ADR 细胞

产品名称：K562耐阿霉素细胞株

培养操作步骤 ：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。 

实验要点及说明 ：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 

2．所使用的盖玻片应该为玻璃**，并经过铬酸洗液处理； 

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时（4h左右），稳定细胞状态，切忌在温箱内静置过夜。

3. 静置后镜检，拍照，记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。

4. 贴壁细胞：若细胞密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，收集细胞瓶内的培养基，留8ml继续培养至80%左右再传代，瓶盖可稍微拧松。

5. 细胞瓶内的培养基含血清和双抗，可收集后4℃保存备用，可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基，一半用客户自备的培养基，使细胞逐渐适应培养条件，以免因不适应而造成生长状态不佳。

6. 细胞胰酶消化液建议使用PBS配制，

7. 因为细胞培养过程外因太多，所以我们的售后保障期为一周，超过一周的细胞我们会酌情处理，但不提供免费更换服务。 细胞运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存方式：（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

250mL Phosphate Buffer，0.5M, pH9.5  Phosphate Buffer，0.5M, pH9.5  常温保存　IL12A / IL-12A 抗體, 鼠單抗 ELISA    50 µg

250mL Phosphate Buffered RIPA  Phosphate Buffered RIPA  常温保存　VEGFA 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB   IP    50 µg

125mL Phosphate Buffered RIPA with Glycerol，2X Phosphate Buffered RIPA with Glycerol，2X 常温保存　4E-BP1 / EIF4EBP1 抗體, 兔單抗 IF   ICC/IF    50 µg

125mL Phosphate Buffered RIPA，2X Phosphate Buffered RIPA，2X 常温保存　IL12A / NKSF1 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

250mL Phosphate Buffered Saline (PBS）,10X, pH7.4  Phosphate Buffered Saline (PBS）,10X, pH7.4  常温保存　IL12A / IL-12A 抗體, 兔單抗 ELISA    50 µg

250mL Phosphate Buffered Saline (PBS),1X  Phosphate Buffered Saline (PBS),1X  常温保存　IL12A / NKSF1 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA   WB  IHC-P    50 µg

500mL Phosphate Buffered Saline Dulbecco’s，10X  Phosphate Buffered Saline Dulbecco’s，10X  常温保存　CD3E 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB    50 µg

4000mL Phosphate Buffered Saline,10X (for blot washing) Phosphate Buffered Saline,10X (for blot washing) 常温保存　4E-BP1 / EIF4EBP1 抗體, 鼠單抗 FCM    50 µg

500mL Phosphate Buffered Saline，10X，without potassium  Phosphate Buffered Saline，10X，without potassium  常温保存　4E-BP1 / EIF4EBP1 抗體 (FITC), 鼠單抗 FCM    25 Test

250mL Phosphate Citrate Buffer，2X  Phosphate Citrate Buffer，2X  常温保存　4E-BP1 / EIF4EBP1 抗體, 鼠單抗 ELISA   WB   IF  ICC/IF    50 µg

500mL Phospho-Protein Extraction Buffer  Phospho-Protein Extraction Buffer  常温保存　4E-BP1 / EIF4EBP1 抗體 (PE), 鼠單抗 FCM    25 Test

500mL Phospho-Protein Extraction Buffer I  Phospho-Protein Extraction Buffer I  常温保存　Vimentin 抗體, 兔單抗 IHC-P    50 µg

500mL Phospho-Protein Extraction Buffer II  Phospho-Protein Extraction Buffer II  常温保存　Carbonic Anhydrase IX / CA9 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA   IHC-P    50 µg

K562耐阿霉素细胞株CD158e  NK  抑制性受体3DL1抗体规格: 0.2ml

MCK10/CD167a/DDR1  神经上皮酪氨酸激酶抗体（乳腺癌激酶10）规格: 0.1ml

CD167b/DDR2  盘状结构域受体蛋白2抗体规格: 0.2ml

CD168/RHAMM  透明质酸介导  游走受体抗体规格: 0.1ml

CD169/sialoadhesin  唾液酸结合性球蛋白样凝集素1抗体规格: 0.2ml

CD170/Siglec-5  唾液酸结合性球蛋白样凝集素5抗体规格: 0.1ml

CD177/NB1  嗜中性粒  抗原CD177抗体规格: 0.2ml

CD226/DNAM-1  CD226抗体规格: 0.1ml

CD229/SLAMF3  CD229抗体规格: 0.2ml

Integrin β2/CD18/LFA-1  整合素β2抗体规格: 0.1ml

Phospho-CD18 (Ser756/Thr758/759)  磷酸化整合素β2抗体规格: 0.1ml

CD184/CXCR4    表面趋化因子受体4抗体规格: 0.1ml

CD19  CD19抗体规格: 0.1ml

操作流程：

1、您收到母细胞后，请按照以下方法进行操作：

取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。

2、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，*后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。

3、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。 

4、细胞复苏：

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2）将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）换用新鲜完全培养基继续培养。