自备仪器和试剂耗材：
仪器准备：
1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备：
1.PBS 缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备：
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
产品简介：
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产品名称 |
规格 |
检测方法 |
适用样本 |
保存温度 |
货号 |
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无毒环保组织固定液 |
500ml |
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2-8℃ |
BH-D85670 |
使用方法：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在 2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或 37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。本公司产品仅用于科研实验。
注意事项：
1. 正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得佳实验效果。
2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
3. 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
4. 样品或试剂被污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5. 好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底残留清洁剂。
6. 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。
操作步骤：
A：组织中提取
1.收集 0.1g 组织，加入 1.0ml Lysis Buffer 1 及适量蛋白酶抑制剂（依据实验选择），冰上用组织研磨器或匀 浆管研磨。
2.将匀浆后样品转移至 1.5ml 离心管中，11000rpm 5min，吸弃上清保留沉淀。
3.至步骤 2。
B：细胞中提取
1.收集约 10 8个细胞，3000rpm 5min（悬浮细胞直接离心，贴壁细胞使用细胞刮刀或胰蛋白酶消化离心收集 均可。注意用预冷 PBS 清洗残留培养基和胰蛋白酶等），吸弃上清。
2.至步骤 1。
步骤 1：加 1.0ml Lysis Buffer 1 及适量蛋白酶抑制剂（依据实验选择），冰上孵育 30min（每 10min 用移液枪 吹打一次），4°C 11000rpm 离心 5min，弃上清。
步骤 2：于上述步骤离心管中加入 200μl Lysis Buffer 2，置于冰上 30min（每 10min 涡旋一次），4°C 11000rpm 离心 5min，吸取上清于一新离心管中。
步骤 3：加入 40μl Balance Buffer 于上述步骤离心管中，用移液枪轻轻吹匀。
步骤 4：使用 BCA 定量试剂盒定量。
步骤 5：于步骤 3 离心管中加入 2.4μl Adjust Buffer，轻轻吹匀，并应用于下游研究。
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Fraser肉汤基础 与Fraser肉汤添加物合用选择增强与鉴定李斯特500g
