海洋微藻的培养、观察与计数
一、实验目的：
1、通过实验了解藻类生长的基本条件和方法，掌握海洋微藻的基本培养方法；
2、显微镜下观察并识别几种常见海洋微藻；
3、了解血球计数板的计数原理，掌握血球计数板的计数方法。
二、实验材料：亚心形扁藻、小球藻、叉鞭金藻；
三、主要实验仪器和器皿
１．显微镜，血球计数板，计数器
２．培养瓶（三角瓶），量筒；
四、试剂
１．培养液： f/2培养液
２．碘固定液
五、培养条件：
光照强度：1200Lux、温度：20-23℃、盐度：3%、光照时间：黑暗/光照=12/12
六、方法和步骤
1、前期准备：各种器皿的**、培养液的配制、准备并培养3种不同的海洋微藻：亚心形扁藻、小球藻、叉鞭金藻；
2、接种：将不同的实验藻种分别接种到盛有培养液的不同三角瓶(100ml)中,接种的藻容量和新培养液之间的比例为1：2～1：3。培养量与总容量的比小于2/3；
3、培养 ：按上述培养条件进行培养，在培养的过程中，每天摇瓶3次，使藻类充分见接触氧气和光照；
4、换代：5-7天换代1次，换代浓度同上；
5、固定：将藻液摇匀，用小三角瓶分别倒取一定量(20-30ml)的上述3种藻液加入几滴碘液，摇匀杀死细胞；
6、取样：摇匀后，用吸管吸取上述不同的藻液分别滴到盖有盖玻片的学球计数板的边缘，使藻液慢慢进入盖有盖玻片的区域，避免盖玻片浮起，用吸水纸轻轻吸走多余的藻液，每种藻液取样2次；
7、观察计数：显微镜下观察不同的藻种并分别计数。
1）血球计数板计数原理
血球计数板是一块特制的载玻片，板的中部一“H” 型的凹槽，横槽两边的平台上各有一个有九个大方格的方格网。每个大格：边长为１ｍｍ，深为0.1mm，容积为0.1mm3(10-4ml)。中间大方格为计数室以计数室为中心，对角线两端各有一个有16个中格组成的大格。