柱式植物RNAOUT使用说明书

产品及特点

本产品是天泽基因植物RNAOUT（CAT#：3080）的柱式升级产品，它结合了植物RNAOUT的高效性(其效果在近五十多种各类植物中得到验证，植物名单见植物RNAOUT产品介绍的附录)和天泽基因柱式纯化系列产品的快捷性。该产品特点如下：

1. 操作更加简单快速，处理一个样品只需要约十分钟，比植物RNAOUT快一倍。

2. RNA纯度更高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能够有效去除大多数植物中的多糖污染。

3. 小RNA回收效率更高。

4. 适用于所有用植物RNAOUT能提出RNA的植物(注:对有些植物可能需要在溶液A中额外添加RVC)。

5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。

6. 性价比高于进口的柱式植物RNA提取产品。

7. 一站式，提供RNase-free的样品收集管。

规格及成分

注：溶液B为淡黄色液体，使用前请观察颜色是否正常。若溶液B有油粒状颗粒及分层，属正常现象，不影响使用。

运输及保存

常温运输，4℃保存，有效期一年。

自备试剂

氯仿。

使用方法

1. 估算组织细胞的用量。每次微量提取一般需要100-200 mg植物叶片、或50-100 mg植物种子、或200-500 mg植物果实。

2. 样品破碎：

1) 匀浆法：先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在RNALOCKER中的植物组织需用纸吸去RNALOCKER液体后再剪切成小块)，放入10-15 mL塑料离心管中，加入1 mL溶液A，然后用匀浆器匀浆5-20秒。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。

2) 液氮研磨法（适用于复杂，易降解样品）：取适量新鲜植物组织放入含液氮的研钵中，迅速将组织研磨成粉末后，将粉末转移到合适的塑料离心管中，加入1 mL溶液A，立即剧烈振荡20秒，充分混匀。

注意：溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。

3. 将匀浆物或液氮研磨物转移至干净的1.5 mL塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。有的植物组织（比如果实）含有大量水份，匀浆液会多于1 mL，转移时也只取1 mL。

4. 在离心管中加入0.3 mL的溶液B和0.2 mL自备氯仿，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。

5. 室温12000-15000 g离心3-5分钟，两相间将有约5-10毫米厚的细胞破碎物。

6. 将上清液(约0.6 mL)转移到另一干净的1.5 mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。*好留下100 uL上清液不取。

7. 加入等体积的溶液C，充分颠倒混匀。如果有沉淀产生（对某些植物，属于正常现象），千万不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。

8. 将一半的溶液（如果有沉淀，则先混匀）转移到离心吸附柱中，13000-15000 g室温离心半分钟，弃穿透液。

9. 将剩下的一半溶液（如果有沉淀，则先混匀）转移到同一离心吸附柱中， 13000-15000 g室温离心半分钟，弃穿透液。

10. 加0.7 mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。再加0.3 mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。一般样品如此洗涤两次即可，但如果在第7步加入溶液C后有沉淀产生，则需要洗三次，每次加入的通用洗涤液的量分别为0.4、0.3和0.3 mL。

11. 室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。

12. 将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中，加入50-100 uL RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。

13. 13000-15000 g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

14. RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子（BioTechniques，28：414，2000）。

15. RNA产量产率测定：将5-10 μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40 μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。

16. RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

关联产品

柱式植物RNAout 2.0（CAT#:90404）。