竞争抑制ELISA检测原理

竞争抑制ELISA检测原理

竞争抑制ELISA法是指将特异性抗体吸附于固相载体，随后加入待测抗原（标准品和样本）和一定量的生物素标记的抗原（检测液A），使二者竞争与固 相抗体结合，温育后经洗涤去掉未结合物，然后加入HRP标记的亲和素，经过温育和彻底洗涤后加入底物 TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。待测标本浓度越高，标记抗原和抗体的结合就越受到抑制，显色愈浅。显色的深浅与酶量呈正相关，而与样品中待测物质含量呈负相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（O.D.值），计算样品浓度。由于生物大分子可标记多个生物素，而生物素可以特异性结合酶标亲和素，放大检测信号，提高**分析敏感性。

小分子抗原或半抗原因仅有单个抗原表位，缺乏双抗体夹心法所需的基本条件——具有2个或2个以上表位，所以对其常用竞争法进行测定。其原理是将待检抗原和酶标抗原与相应固相抗体竞争结合，标本中抗原越多，与固相抗体结合的酶标抗原越少，与底物反应生成的颜色越浅，因此根据颜色深浅可定量测定。原理图如下：