考马斯亮蓝测蛋白质方法
蛋白质浓度测定的方法有很多，考马斯亮蓝测定蛋白质是实验室*常见的一种方式，它利用比色法和色素法混合方法、操作简便，
考马斯亮蓝测蛋白质原理：
考马斯亮蓝G-250(Coomassie?brilliant?blue?G-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。该染料在游离状态下呈红色，在稀酸溶液中当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色，前者*大光吸收在465nm，后者在595nm在一定蛋白质浓度范围内（1-1000μg），蛋白质与色素结合物在595nm波长下的吸光度与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质的定量测定。
考马斯亮蓝G-250于蛋白质结合反应十分迅速，2min左右即达到平衡。其结合物在室温下1h内保持稳定。此法灵敏度高，易于操作，干扰物质少，是一种比较好的定量法。其缺点是在蛋白质含量很高时线性偏低，且不同来源蛋白质与色素结合状况有一定差异。
材料、仪器设备及试剂
1、材料
小麦叶片、马铃薯块茎、或其他植物材料
2、仪器设备<
分光光度计、研钵、烧杯、移液管
3、试剂
（1）标准蛋白质溶液：100μg·Ml-1牛血清白蛋白：称取牛血清白蛋白25mg，加水溶解并定容至100ml,吸取上述溶液40ml，用蒸馏水稀释至100ml即可。
（2）考马斯亮蓝G-250溶液：称取100mg考马斯亮蓝G-250，溶于50ml90%乙醇中，加100ml85%（W/V）的磷酸，再用蒸馏水定容到1L，贮于棕色瓶中，常温下可保存一个月。
考马斯亮蓝测蛋白质方法：
（1）标准曲线的绘制?取6支具塞试管，按表加入试剂。混合均匀后，向各管中加入5ml考马斯亮蓝G-250溶液，摇匀，并放置5min左右，在595nm下比色测定吸光度。以蛋白质
浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
样品测定
样品提取：取鲜样0.5g，加入2ml蒸馏水研磨，磨成匀浆后用6ml蒸馏水冲洗研钵，洗涤液收集在同一离心管中，在4000r/min下离心10min，弃去沉淀，上清液转入容量瓶，以蒸馏水定容至10ml，摇匀后待测
（2）吸取样品提取液0.1ml，放入具塞试管中（每个样品重复2次），加入5ml考马斯亮蓝<
G-250溶液，充分混合，放置2min后在595nm下比色，测定吸光度，并通过标准曲线查得蛋白质含量。
（3）结果计算（单位mg/g）样品中蛋白质含量=（C·VT）/(1000?VS·WF)
（参考文献：郝建军，康宗利，于洋，植物生理学实验技术，北京：化学工业出版社，2006.12，107-109）
注意事项
在试剂加入后的5-20 min内测定光吸收，因为在这段时间内颜色是*稳定的。
测定中，蛋白-染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上，测定完后可用乙醇将蓝色的比色杯洗干净。
利用考马斯亮蓝法分析蛋白必须要掌握好分光光度计的正确使用，重复测定吸光度时，比色杯一定要冲洗干净，制作蛋白标准曲线的时候，蛋白标准品*好是从低浓度到高浓度测定，防止误差。