台盼蓝染色液配制

台盼蓝染色液配制

台盼蓝又称台盼兰、锥虫蓝、曲利苯蓝，常用于检测细胞膜的完整性。还常用于检测细胞是否存活。台盼蓝可被巨噬细胞吞噬，故可用于巨噬细胞的活体染色剂。

台盼蓝染色液的原理

细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合，使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。严格来说，台盼蓝染色检测的是细胞膜的完整性， 通常认为细胞膜丧失完整性，即可认为细胞已经死亡。这被称为染料排除测试。通过显微镜很容易就能识别出死亡的被台盼蓝染色的细胞，并可使用细胞计数器进行计数。

4％台盼蓝母液配制

1.称取4克台盼蓝，

2.加入少量蒸馏水研磨，

3.加0.9%NaCl至100毫升，

4.用滤纸过滤，4℃保存。或者直接用0.9%的生理盐水或者PBS配成母液用的时候用生理盐水或者PBS稀释。

台盼蓝染色法操作步骤：（仅供参考）

材料：

1. 显微镜、玻片、盖玻片、滴管；

2. 试剂：0.4%台盼蓝染液；

3. 台盼蓝（Trypan blue）：0.4g；

4. 生理盐水：100ml；

步骤：

1. 用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液；

2. 用0.5%胰蛋白酶：0.2%EDTA=1：1混合液来消化培养的贴壁细胞；

3. 再加入适量Hanks液制成细胞悬液；

4. 将待染色细胞稀释至所需浓度（方法及浓度范围与细胞计数相同）；

5. 每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴，室温下染3—5min；

6. 染色过的细胞材料，取一滴细胞悬液置玻片上，加盖玻片后放高倍镜下观察；

7. 死亡的细胞着浅蓝色并膨大，无光泽。活细胞不着色并保持正常形态，有光泽；

8. 计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目；

9. 统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率。

细胞活率（%）=未染色的细胞数/观察的细胞总数×100。