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PCR反应两种荧光化学物质浅析
实时荧光定量PCR所使用的荧光物质可分为两种:荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下:1.TaqMan荧光探针:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可
发布时间:2023-11-20 11:02
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细胞培养注意事项
细胞培养注意事项:1.收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。2.仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等,确保细胞培养条件一致,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由客户自行承担。3.用75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎
发布时间:2023-11-13 16:30
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细胞培养中血清主要用途
细胞培养中血清主要用途:1、提供基本营养物质:氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等,是细胞生长必须的物质。2、提供**和各种生长因子:胰岛素、肾上腺皮质**(地塞米松)、类固醇**(雌二醇、睾酮、孕酮)等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。3、提供结合蛋白:结合蛋白作用是携带重要地低分子量物质,如白蛋白携带维生素、脂肪、以及**等,转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细
发布时间:2023-11-10 16:52
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实时荧光定量PCR荧光物质阐述
实时荧光定量PCR所使用的荧光物质可分为两种:荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下:1.TaqMan荧光探针:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可
发布时间:2023-11-06 11:40
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培养细胞生长缓慢可能原因及解决方法
培养细胞生长缓慢可能原因及解决方法:可能原因:1、由于更换不同培养液或血清;2、培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏;3、培养物中有少量**或**污染;4、试剂保存不当;5、接种细胞起始浓度太低;6、细胞已老化;7、支原体污染。解决方法:1、比较新培养液与原培养液成分,比较新血清与旧血清支持细胞生长实验,让细胞逐渐适应新培养液;2、换入新鲜配置培养液,或补加谷氨酰胺
发布时间:2023-10-27 13:19
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TER雌激su受体ELISA试剂盒样本实验前准备
TER雌激su受体ELISA试剂盒样本实验前准备:ELISA试剂盒液体样本:包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。1、血清室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。2、血浆:应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)
发布时间:2023-10-16 10:28
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贴壁细胞与悬浮细胞传代
操作步骤:1、贴壁细胞传代:提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量
发布时间:2023-10-09 14:22
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AD人Adropin蛋白ELISA试剂盒实验操作注意事项
AD人Adropin蛋白ELISA试剂盒实验操作注意事项:1、加样:①实验样本过多时,可分批次操作,以减少实验时间延长造成的误差;②加酶试剂后,用吸水纸吸干孔外试剂;③作定量试验时,使用加样器加注试剂,并经常校正其准确性,此外,要做到一份样本一个移液头,防止交叉污染。2、温育:①如有两种温度,尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件;②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察;③96孔板周围孔与
发布时间:2023-10-03 10:52
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标准物质的五大类特性
标准物质的五大类特性:1、化学成分类:标准物质,纯的化合物或是有代表性的基体样品,天然的或添加(被)分析物的(如,用作农药残留分析的添加了杀虫剂的动物脂肪),以一种或多种化学或物理化学特性值表征。2、生物和临床特性类:与目录A相似的标准物质,但以一种或多种生化或临床特性值表征,如酶活性。3、物理特性类:以一种或多种物理特性值表征的标准物质,如熔点、粘性和密度。4、工程特性类:以一种或多种工程特性值
发布时间:2023-09-26 09:48
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ELISA试剂盒检测结果分析方法
ELISA试剂盒检测结果分析方法:1、ELISA实验中样品都要做复孔或三孔,然后计算每个浓度标准品的平均OD值,复孔的变异系数应该小于20%。2、平均OD值减去空白孔的OD值。3、制作标准曲线。 以减去本底后的OD值为X轴,标准品的浓度为Y轴,利用作图软件得出一个合适的计算方法。建议使用合适的软件来作图,比如CurveExpert1.4。这款软件能够给出很多种方法(比如直线、半对数、对数、四参
发布时间:2023-09-18 16:22
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影响培养基灭jun 效果的因素
影响培养基灭jun效果的因素:1、微生物种类:不同的微生物k值不同。2、初始菌量:在保持N值不变的前提下,t与初始菌量N0的对数成正比。3、培养基成份:油脂、蛋白质增加微生物的耐热性。4、传热与混合状况:影响受热均匀度。5、培养基中固体颗粒的存在影响热穿透。6、蒸汽中空气的存在降低蒸汽分压和灭jun温度。7、pH:酸性pH下可加快微生物热死速率
发布时间:2023-09-11 11:13
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LAMP试剂盒PCR反应的特异性决定因素
PCR反应的特异性决定因素为:①引物与模板DNA特异正确的结合;②碱基配对原则;③TaqDNA聚合酶合成反应的忠实性;④靶基因的特异性与保守性。其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及TaqDNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。
发布时间:2023-08-30 10:27
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大鼠ELISA试剂盒实验操作步骤要点
大鼠ELISA试剂盒实验操作步骤要点:1.加样:①实验样本过多时,可分批次操作,以减少实验时间延长造成的误差;②加酶试剂后,用吸水纸吸干孔外试剂;③作定量试验时,使用加样器加注试剂,并经常校正其准确性,此外,要做到一份样本一个移液头,防止交叉污染。2.温育:①如有两种温度,尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件;②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察;③96孔板周围孔与中心孔在温育中的热力
发布时间:2023-08-22 15:02
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ELISA包被条件选择指南
1.包被抗原的选择包被抗原可分为天然蛋白、重组蛋白和小分子抗原三大类。天然蛋白需经纯化才能用直接吸附法包被,对于含杂质较多的抗原可以采用间接捕获法包被(先用能够与目的抗原反应的物质如抗体直接吸附在酶标板上,再通过特异性反应使抗原固相化)。经纯化的重组蛋白一般皆可直接包板。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有机化合物,由于分子量太小,往往难于直接吸附在酶标板上,一般都先使其与无关蛋白质如BSA等偶联,
发布时间:2023-08-14 13:05
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细胞培养操作规程
细胞培养操作规程:一.培养基及培养冻存条件准备:1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优zhi胎牛血清,10%。2、培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。3、冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。二.细胞处理:1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴
发布时间:2023-08-07 10:35
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