A549细胞
人肺癌细胞 货号：A549 规格： 1*10 6
细胞介绍 该细胞系由D.J.Griad通过肺癌组织移植培养建系，患者为58岁白人男性。A549能通过胞苷二磷酸胆碱途径合成含有高含量不饱和脂肪酸的卵磷脂。 A549细胞特性 1）来源：肺癌 2）形态：上皮细胞样，贴壁生长 3）含量：>1x106 个/mL 4）污染：支原体、**、酵母和**检测为阴性 5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装 A549细胞接受后的处理： 1）收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。 2）请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。 3）弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的完全培养基。 4）如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。 5）接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。 细胞用途：仅供科研使用。 本公司的A549细胞培养操作规程，供参考 一．培养基及培养冻存条件准备： 1）准备F-12K培养基（F-12K，GIBCO,货号21127-022），90%；上等胎牛血清，10%。 2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。 3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。 二．细胞处理： 1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混 合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。**天换 液并检查细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。 3.轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。 4.移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。 3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1，细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2，4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x10E6/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。 3，将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
A549细胞注意事项： 1. 收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。 2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物**台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要**后方能丢弃。