BT-549细胞
人乳腺癌细胞
货号：BT-549
规格： 1*10 6
细胞介绍
来源组织是一个**状侵入性导管瘤，7个局部**结中3个已有转移。建立的细胞是多态性的，包括上皮细胞样组分和多核巨细胞。向培养基中分泌粘液素样物质。
BT-549细胞细胞特性
1）来源：乳腺,乳腺导管癌
2）形态：上皮细胞样
3）含量：>1x106 个/mL
4）污染：支原体、**、酵母和**检测为阴性
5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供科研使用。
BT-549细胞细胞培养步骤
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091)；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，10%；添加0.023u/mL胰岛素；双抗1%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．BT-549细胞细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，离心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中培养，补加培养基至6ml。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2ml完全培养基终止消化。
3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1:5比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
下面T25瓶为例；
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至*终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
BT-549细胞注意事项：
1. 收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。 2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物**台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要**后方能丢弃。