A549/DDP细胞
人非小细胞肺癌细胞耐药亚株
货号：A549/DDP
规格： 1*10 6
细胞介绍
这株细胞是用**剂量增选法筛选获得的A549细胞耐药亚株。
A549/DDP细胞细胞特性
1）来源：肺癌
2）形态：上皮细胞样
3）含量：>1x106 个/mL
4）污染：支原体、**、酵母和**检测为阴性
5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
运输和保存：使用含有上等胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供科研使用。
A549/DDP细胞细胞培养步骤
一．培养基及培养冻存条件准备：
注意：客户收到细胞后按照下面的要求操作：培养瓶里面的培养液是不含**的。待细胞长到 70-80%的汇合度时，去掉培养液，加入含 500ng/ml DDP**的培养液，放入培养箱，这段时间肯定会有小部分细胞悬浮起来，但是不要紧，通过换液可以去掉，下面的细胞待长满就可以消化传瓶了，这时可以一直用含药培养液来消化培养细胞，一两代之后可以将**浓度提高到 800ng/ml，含药培养液用于细胞培养都没问题的，冻存的时候就不要在冻存液里面加**了。
1）准备1640培养基(Gibco)，90%；上等胎牛血清，10%，添加PS，1%，1~2ug/ml DDP。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．A549/DDP细胞细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。**天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
A549/DDP细胞注意事项：
1. 收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。 2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物**台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要**后方能丢弃。