使用前请仔细阅读说明书，如有任何问题，请**时间与销售人员联系！
细胞名称
HMC-1 人肥大细胞
货 号
XY-XH5987
细胞来源
国际引进
细胞形态
**母细胞样
生长方式
悬浮生长
描 述
来源于一名 52 岁男性肥大细胞白血病患者的外周血样本。该细胞有多重亚型分别为：HMC-1 5C6，HMC-1.1 ，HMC-1.2 。广泛用于人肥大细胞功能研究，因为它们表现出组织肥大细胞的许多关键特征，例如组胺、类胰蛋白
酶、肝素和类似细胞表面抗原谱的表达 （1,2）。受体酪氨酸激酶 KIT 在肥大细胞上表达，在肥大细胞的增殖、功能和存活中起重要作用。KIT 中的激活突变与肥大细胞生长失调有关，并与肥大细胞肿瘤和系统性肥大细胞增
多症有关。据报道，HMC-1 细胞系中存在两个 KIT 激活点突变 。这两种突变都将受体转化为组成型酪氨酸磷酸化和活性状态，导致生长因子非依赖性增殖。HMC-1.1 （HMC-1（560）） 和 HMC-1.2 （HMC-1（560,816）） 是HMC-1 细胞系的两个变异亚系。HMC-1.1 具有 V560G 突变，但不具有 D816V 突变。HMC-1.2 同时具有 V560G 和D816V 突变，并且表现出比 HMC-1.1 更高的增殖率。有人认为，HMC-1.2 的较高增殖潜力可能归因于 D816V 突变。
培养条件
IMDM培养基；上等胎牛血清，10%；双抗，1%。；
气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%
换液频率
2-3天
传代比例
**传代建议1:2
冻存液配方
无血清细胞冻存液（XYC90100）
备 注
运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后**次传代建议T25培养瓶1：2传代 。
供应限制
仅供研究之用。
细胞图片
照片版来源于德国默克
运输和保存：
干冰运输及复苏好存活细胞：（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理：
1）收到细胞后，75%酒精**瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
细胞处理：
1）冻存细胞的复苏：
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。**天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3. 轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
悬浮细胞参考：
大多数悬浮细胞对于环境比较敏感，建议一直维持高密度生长，一般情况下细胞密度维持在 1×10 5 到 1×10 6个/mL（不同细胞对密度要求不同）。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中 800-1000rpm，离心 5min，弃去上清，补加 1-2mL 培养液后重悬混匀后将细胞悬液按 1：2 的比例（**可以 1:1 分瓶）分到新 T25 瓶中，添加5-6ml 按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按 1:2 和以上比例进行。大多数血液类相关的悬浮细胞受运输影响比较大，会出现一批死细胞，如果因此密度降低了，可以离心后转移至 T25 瓶中竖着培养，培养基添加 5ml 以提高总体密度，隔**后观察密度可以的话再补液 3ml 完全培养基后 T25 瓶放倒，等沉淀稳定后观察细胞密度，持续添加培养基等密度上升足够传代为止。
3）细胞冻存:
收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例；
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.
2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
注意事项：
1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物**台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要**后方能丢弃。
2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造伤害。
细胞培养常见问题及解决方法
问题
原因
解决方案
细胞生长缓慢
生长培养基使用不当
按照生产商的建议，使用相应的预热生长培养基。
生长培养基中血清质量差
使用其他批次血清。
传代操作不当
按照生产商的建议消化时间及传代比例进行操作。
换液过于频繁
降低换液频率，参考生产商推荐的换液频率。
细胞传代次数过多
使用传代次数较少的健康细胞。
细胞生长超过汇合状态
哺乳动物细胞传代应在细胞处于对数期、未达到汇合状态时进行，建议细胞密度达 80-90%传代。
细胞被支原体污染
将细胞、培养基和试剂丢弃；新取一只冻存细胞，并且使用新的培养基和试剂。
细胞复苏存活率低
细胞冻存不当
新取一只冻存细胞，并储存在液氮中。将细胞储存在液氮中，直至复苏。
自行制备的冻存细胞无活性
将细胞按照生产商推荐的密度冻存。
制备冻存细胞时使用传代次数少的细胞。
严格按照生产商推荐的操作程序冻存细胞。请注意本手册推荐的冷冻程序是冻存细胞的一般流程，只能作为指导原则使用。
新取一只冻存细胞。
细胞复苏方法不当
严格按照生产商推荐的操作程序复苏细胞。请注意本手册推荐的解冻程序是复苏细胞的一般流程，只能作为指导原则使用。
确保冷冻细胞解冻迅速，接种前用预热的生长培养基缓慢稀释细胞。
复苏培养基使用不当
使用生产商推荐的培养基。确保培养基使用前已经预热。
细胞稀释过度
按照生产商的建议，将解冻后的细胞高密度接种，以改善复苏效果。
处理细胞时动作不够轻柔
冻存和复苏过程对大多数细胞都会造成不利影 响。不要通过涡旋振荡或者用力敲打培养瓶的方法使细胞脱落(培养昆虫细胞时除外)，也不要高速离心细胞。
冻存液中所用保护剂在储存过程中未避光
如果未避光储存，冻存保护剂会转变为对细胞有毒性的物质；新取一只冻存保护剂，重新冻存细胞。