Changliver(Chang liver)；人张氏肝细胞详细说明
细胞名称 Changliver(Chang liver)；人张氏肝细胞
生长特性 贴壁生长
形态特性 上皮样
产品规格 1×10^6 cells/瓶
培养条件 RPMI-1640+10%FBS+1%P/S
生长条件 气相：5%CO2 95% 空气 温度：37 ℃
冻存条件 90%FBS+10%DMSO
Changliver(Chang liver)；人张氏肝细胞常规说明：
冻存液成分：10%DMSO+40%FBS+50%基础培养液
细胞质检情况：不含**、**、支原体等微生物污染
传代建议：1:2~1:3传代，2~3天换液1次
特别提醒：签收细胞后，如细胞状态不佳，或培养中遇到问题，烦请当天尽快联系，以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要的参考依据，请务必重视。
一、 Changliver(Chang liver)；人张氏肝细胞复苏
1. 把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后（大概1-1.5分钟），拿出来喷点酒精放到超净工作台里。
2. 把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中（用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来），1000转离心5分钟。
3. 把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。
4. 标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。
5. 3天换一次培养基。
二、 Changliver(Chang liver)；人张氏肝细胞传代
1. 培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。
2. 把原有培养基吸掉。
3. 加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞就行），消化1-2分钟。
4. 细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。
5. 用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。
6. 把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。
7. 倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。
8. 根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。继续培养。
三、 Changliver(Chang liver)；人张氏肝细胞冻存
把细胞消化下来并离心（同上）。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到**的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。
冻存液的配制： 70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。
要注意的就是无菌操作！
细胞培养常见问题及解决方法
问题
原因
解决方案
细胞生长缓慢
生长培养基使用不当
按照生产商的建议，使用相应的预热生长培养基。
生长培养基中血清质量差
使用其他批次血清。
传代操作不当
按照生产商的建议消化时间及传代比例进行操作。
换液过于频繁
降低换液频率，参考生产商推荐的换液频率。
细胞传代次数过多
使用传代次数较少的健康细胞。
细胞生长超过汇合状态
哺乳动物细胞传代应在细胞处于对数期、未达到汇合状态时进行，建议细胞密度达 80-90%传代。
细胞被支原体污染
将细胞、培养基和试剂丢弃；新取一只冻存细胞，并且使用新的培养基和试剂。
细胞复苏存活率低
细胞冻存不当
新取一只冻存细胞，并储存在液氮中。将细胞储存在液氮中，直至复苏。
自行制备的冻存细胞无活性
将细胞按照生产商推荐的密度冻存。
制备冻存细胞时使用传代次数少的细胞。
严格按照生产商推荐的操作程序冻存细胞。请注意本手册推荐的冷冻程序是冻存细胞的一般流程，只能作为指导原则使用。
新取一只冻存细胞。
细胞复苏方法不当
严格按照生产商推荐的操作程序复苏细胞。请注意本手册推荐的解冻程序是复苏细胞的一般流程，只能作为指导原则使用。
确保冷冻细胞解冻迅速，接种前用预热的生长培养基缓慢稀释细胞。
复苏培养基使用不当
使用生产商推荐的培养基。确保培养基使用前已经预热。
细胞稀释过度
按照生产商的建议，将解冻后的细胞高密度接种，以改善复苏效果。
处理细胞时动作不够轻柔
冻存和复苏过程对大多数细胞都会造成不利影 响。不要通过涡旋振荡或者用力敲打培养瓶的方法使细胞脱落(培养昆虫细胞时除外)，也不要高速离心细胞。
冻存液中所用保护剂在储存过程中未避光
如果未避光储存，冻存保护剂会转变为对细胞有毒性的物质；新取一只冻存保护剂，重新冻存细胞。