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细胞各形态分述
根据细胞是否贴附于支持物上生长,形态有所不同。呈悬浮生长时,不论细胞原来源于体内何种类型细胞.由于生长在液体环境中,胞体基本呈圆形。大多数细胞是贴附型生长的。当细胞贴附在支持物上后,细胞分化现象常变得不显著,易失去它们在体内时的原有特征.在形态上表现单一化的现象。贴附于支持物表面后,开始仍为圆形,但为时很短,很快便经过形态演变过渡成扁平形态。1.成纤维细胞型:此细胞形态与体内成纤维细胞的相似而得名
发布时间:2023-05-18 11:34
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ELISA试剂盒检测样本血清应用注意事项
大部分elisa检测均以血清为标本。血清标本可按惯例方法收集,应留意防止溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为符号的ELISA测定中,溶血标本可能会添加非特异性显色。血清标本宜在新鲜时检测。如有xi 菌污染,?菌体中可能含有内源性HRP,也会发生假阳性反应。 一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃。超越一周测定的需-20℃保存。冻住血清融解后,蛋白质局部浓缩,散
发布时间:2023-05-09 11:39
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ELISA移液技术注意要点
ELISA移液技术注意要点如下:1.移液时,枪头应对准孔,避免接触孔壁及底部。2.移液后轻轻晃动混匀试剂。3.如果您的样品具有黏性,请预先润洗枪头以消除表面张力的影响。吸液时等待片刻使体积平衡后再取出。4.移液不充分或移液体积不均,说明移液器需要校正。必要时请检查移液器并重新校正。5.加样时,不同的试剂标准品和样本间都要确保更换枪头,避免交叉污染。6.确保使用合适的枪头。不合适的枪头无法正确量取吸
发布时间:2023-05-06 13:31
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PCR反应引物纯化的几种方式选择
PCR反应引物纯化的几种方式选择:1、脱盐寡核苷酸合成后,为了纯化寡核苷酸成为天然的DNA结构,首先必须去除保护基团。通过浓氨水处理,合成的寡核苷酸从固相载体上分离,2-氰乙氧基--磷酸二脂键的保护基团,以及碱基的保护基团基(苯甲酰基和异丁基)被去除,从而形成了天然的DNA结构。然而,必要的去保护步骤完成后,寡核苷酸混合物还包含几种必须被去除的小分子有机化合物。所有非必须有机化合物被移除的过程通常
发布时间:2023-04-25 11:12
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PCR循环参数解析
循环参数:1.预变性模板DNA完全变性与PCR酶的完全激活对PCR能否成功至关重要,建议加热时间参考试剂说明书,一般未修饰的Taq酶激活时间为两分钟。2.变性步骤循环中一般95℃,30秒足以使各种靶DNA序列完全变性,可能的情况下可缩短该步骤时间。变性时间过长损害酶活性,过短靶序列变性不彻底,易造成扩增失败。3.引物退火退火温度需要从多方面去决定,一般根据引物的Tm值为参考,根据扩增的长度适当下调
发布时间:2023-03-22 11:11
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体内DNA复制和体外PCR扩增DNA不同点
不同点1、条件不同体内DNA复制:以DNA双链、细胞分裂环境为条件。体外PCR扩增DNA:以模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件。2、过程不同体内DNA复制:是DNA双链在细胞分裂以前的分裂间期S期进行复制,包括引发、延伸、终止的过程。体外PCR扩增DNA:是将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经高温变性、低温退火、引物延伸等多次循环过程。
发布时间:2023-03-07 13:26
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PCR反应阴性对照出现明显扩增分析
PCR反应阴性对照出现明显扩增1、 反应体系组分(如水)被污染:实验过程中,更换新的Mix或者水重复实验。2、 标本间的交叉污染或产物污染:反应体系在超净工作台内配制,对实验室进行严格的区分,减少气溶胶污染;使用带滤芯的枪头。3、 引物二聚体的出现:引物设计不够优化:应避免引物二聚体和发夹结构的出现。4、引物浓度不佳:适当降低引物的浓度,并注意上下游引物的浓度配比。在35循环后阴性对照出现扩增属正
发布时间:2023-03-01 15:44
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PCR的两步法和三步法不同点
1、步骤不同:两步法退火和延伸同时在60℃-65℃间进行,以减少一次升降温过程,而三步法则分两次完成。2、用时不同:两步法减少一次升降温过程,提高了反应速度,用时较短。而三步法则比两步法用时更长。3、适用条件不同:两步法中,PCR扩增区很短,即使Taq酶活性不是zui佳也能在很短的时间内复制完成。三步法的PCR扩增区则较长,需要降低系统温度,引物与DNA模板结合,形成局部双链。
发布时间:2023-02-13 16:40
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ELISA试验洗板机洗板洗涤次数把控
洗板机洗板人为因素少,速度快,条件恒定,使用洗板机洗板时应特别注意洗涤次数关键点。1、影响洗涤效果的主要参数是洗涤循环的量。当然,洗涤次数越多,背景越低。然而,太多次的洗涤会降低信号强度,使其难以测定。通常的做法是在每次抗体或抗原孵育后重复洗涤三次。不过,一般而言,包被平板需要的洗涤次数比用户包被的平板要少。对于用户包被的ELISA板,必须优化洗涤次数。
发布时间:2023-01-30 14:32
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PCR反应过程防止污染的方法
PCR反应过程防止污染的方法:1、合理分隔实验室:将样品的处理、配制PCR反应液、PCR循环扩增及PCR产物的鉴定等步骤分区或分室进行,特别注意样本处理及PCR产物的鉴定应与其它步骤严格分开。zui好能划分①标本处理区;②PCR反应液制备区;③PCR循环扩增区;④PCR产物鉴定区。其实验用品及吸样枪应专用,实验前应将实验室用紫外线消du以破坏残留的DNA或RNA。2、吸样枪:吸样枪污染是一个值得注
发布时间:2023-01-17 13:26
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PCR退火(复性)温度与时间
退火(复性)温度与时间:退火温度是影响PCR特异性的较重要因素。变性后温度快速冷却至40℃~60℃,可使引物和模板发生结合。由于模板DNA比引物复杂得多,引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞。退火温度与时间,取决于引物的长度、碱基组成及其浓度,还有靶基序列的长度。对于20个核苷酸,G+C含量约50%的引物,55℃为选择zui适退火温度的起点较为理想。引物的复性温度可通过以下公式
发布时间:2023-01-05 16:10
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小鼠ELISA试剂盒移液器的使用方法
小鼠ELISA试剂盒移液器的使用技巧: 1、设定移液体积:从小量程调节至大量程时,应先调至超过设定体积刻度,再回调至设定体积,这样可以保证移液器的精que度; 2、装配枪头:将移液枪垂直插入吸头,左右旋转半圈,上紧即可; 3、吸液和放液:吸头浸入液面3mm以下,吸液前枪头先在液体中预润洗2-3次确保移液的精度和准度,慢吸慢放,以防突然松开溶液吸入过快而冲入取液器内腐蚀柱塞而造成漏气; 4、吸有液体
发布时间:2022-11-24 13:04
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从外观辨别胎牛血清方法
从外观辨别胎牛血清方法如下:1、颜色根据血红蛋白含量的不同,胎牛血清可表现出黄色或红色,我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl,实际上,血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响,这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度,良好的操作能降低血清的溶血。国产血清的采血点很分散,大多是由屠户采血后马上离心收集,所以很少会有溶血,表现出明亮的蜡黄色,当然,国产血清也很少有标准意义上的胎牛血清。进
发布时间:2022-11-15 10:40
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胎牛血清使用过程重要方法
胎牛血清为细胞生长提供必要的营养物质。胎牛血清(FBS)是zui广泛使用的细胞培养基生长补剂,因其含有大量的胚胎生长促进因子。它在使用过程的注意事项:1、注意避免沉淀加入培养液添加胎牛血清的时候要注意避免把沉淀加入培养液,因为如果培养液有沉淀的存在,会使得其中培养的细胞产生大量的黑点,除此之外,细胞的表面还很可能会覆盖一层油状物质,总之出现这样的情况会极其不利于细胞的正常生长。那么为了zui大程度
发布时间:2022-11-08 13:18
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核酸检测试剂盒实验注意事项
核酸检测试剂盒实验注意事项:①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。②使用干净的塑料容器配置洗涤液。③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。⑥使
发布时间:2022-11-03 10:21
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