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体内DNA复制和体外PCR扩增DNA不同点
不同点1、条件不同体内DNA复制：以DNA双链、细胞分裂环境为条件。体外PCR扩增DNA：以模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件。2、过程不同体内DNA复制：是DNA双链在细胞分裂以前的分裂间期S期进行复制，包括引发、延伸、终止的过程。体外PCR扩增DNA：是将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经高温变性、低温退火、引物延伸等多次循环过程。
发布时间：2023-03-07 13:26
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PCR反应阴性对照出现明显扩增分析
PCR反应阴性对照出现明显扩增1、 反应体系组分（如水）被污染：实验过程中，更换新的Mix或者水重复实验。2、 标本间的交叉污染或产物污染：反应体系在超净工作台内配制，对实验室进行严格的区分，减少气溶胶污染；使用带滤芯的枪头。3、 引物二聚体的出现：引物设计不够优化：应避免引物二聚体和发夹结构的出现。4、引物浓度不佳：适当降低引物的浓度，并注意上下游引物的浓度配比。在35循环后阴性对照出现扩增属正
发布时间：2023-03-01 15:44
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PCR的两步法和三步法不同点
1、步骤不同：两步法退火和延伸同时在60℃-65℃间进行，以减少一次升降温过程，而三步法则分两次完成。2、用时不同：两步法减少一次升降温过程，提高了反应速度，用时较短。而三步法则比两步法用时更长。3、适用条件不同：两步法中，PCR扩增区很短，即使Taq酶活性不是zui佳也能在很短的时间内复制完成。三步法的PCR扩增区则较长，需要降低系统温度，引物与DNA模板结合，形成局部双链。
发布时间：2023-02-13 16:40
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ELISA试验洗板机洗板洗涤次数把控
洗板机洗板人为因素少，速度快，条件恒定，使用洗板机洗板时应特别注意洗涤次数关键点。1、影响洗涤效果的主要参数是洗涤循环的量。当然，洗涤次数越多，背景越低。然而，太多次的洗涤会降低信号强度，使其难以测定。通常的做法是在每次抗体或抗原孵育后重复洗涤三次。不过，一般而言，包被平板需要的洗涤次数比用户包被的平板要少。对于用户包被的ELISA板，必须优化洗涤次数。
发布时间：2023-01-30 14:32
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PCR反应过程防止污染的方法
PCR反应过程防止污染的方法：1、合理分隔实验室:将样品的处理、配制PCR反应液、PCR循环扩增及PCR产物的鉴定等步骤分区或分室进行，特别注意样本处理及PCR产物的鉴定应与其它步骤严格分开。zui好能划分①标本处理区;②PCR反应液制备区;③PCR循环扩增区;④PCR产物鉴定区。其实验用品及吸样枪应专用，实验前应将实验室用紫外线消du以破坏残留的DNA或RNA。2、吸样枪:吸样枪污染是一个值得注
发布时间：2023-01-17 13:26
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PCR退火(复性)温度与时间
退火(复性)温度与时间：退火温度是影响PCR特异性的较重要因素。变性后温度快速冷却至40℃～60℃，可使引物和模板发生结合。由于模板DNA比引物复杂得多，引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞。退火温度与时间，取决于引物的长度、碱基组成及其浓度，还有靶基序列的长度。对于20个核苷酸，G+C含量约50%的引物，55℃为选择zui适退火温度的起点较为理想。引物的复性温度可通过以下公式
发布时间：2023-01-05 16:10
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小鼠ELISA试剂盒移液器的使用方法
小鼠ELISA试剂盒移液器的使用技巧： 1、设定移液体积：从小量程调节至大量程时，应先调至超过设定体积刻度，再回调至设定体积，这样可以保证移液器的精que度； 2、装配枪头：将移液枪垂直插入吸头，左右旋转半圈，上紧即可； 3、吸液和放液：吸头浸入液面3mm以下，吸液前枪头先在液体中预润洗2-3次确保移液的精度和准度，慢吸慢放，以防突然松开溶液吸入过快而冲入取液器内腐蚀柱塞而造成漏气； 4、吸有液体
发布时间：2022-11-24 13:04
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从外观辨别胎牛血清方法
从外观辨别胎牛血清方法如下：1、颜色根据血红蛋白含量的不同，胎牛血清可表现出黄色或红色，我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl，实际上，血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响，这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度，良好的操作能降低血清的溶血。国产血清的采血点很分散，大多是由屠户采血后马上离心收集，所以很少会有溶血，表现出明亮的蜡黄色，当然，国产血清也很少有标准意义上的胎牛血清。进
发布时间：2022-11-15 10:40
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胎牛血清使用过程重要方法
胎牛血清为细胞生长提供必要的营养物质。胎牛血清（FBS）是zui广泛使用的细胞培养基生长补剂，因其含有大量的胚胎生长促进因子。它在使用过程的注意事项：1、注意避免沉淀加入培养液添加胎牛血清的时候要注意避免把沉淀加入培养液，因为如果培养液有沉淀的存在，会使得其中培养的细胞产生大量的黑点，除此之外，细胞的表面还很可能会覆盖一层油状物质，总之出现这样的情况会极其不利于细胞的正常生长。那么为了zui大程度
发布时间：2022-11-08 13:18
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核酸检测试剂盒实验注意事项
核酸检测试剂盒实验注意事项：①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。②使用干净的塑料容器配置洗涤液。③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。⑥使
发布时间：2022-11-03 10:21
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ELISA实验的洗涤次数
影响洗涤效果的主要参数是洗涤循环的量。当然，洗涤次数越多，背景越低。然而，太多次的洗涤会降低信号强度，使其难以测定。通常的做法是在每次抗体或抗原孵育后重复洗涤三次。不过，ELISA板的**商会对洗涤次数提出建议。一般而言，**商包被平板需要的洗涤次数比用户包被的平板要少。对于用户包被的ELISA板，必须优化洗涤次数。控制洗涤量和洗涤次数的另一种方法是加入过量的洗涤液。一般来说，96孔板的每个孔能容
发布时间：2022-10-27 11:02
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ELISA试验中比色着重关注两个方面
ELISA的比色测定由酶标仪进行，有的同行可能会认为，既然由酶标仪进行，那么此时便可以万事大吉了，其实不然，因为当代较为先进的酶标仪器仪表，均有较多的功能，使用不当，会得到令人难以理解的结果。如使用酶标仪比色测定后，有许多阴性测定孔的吸光度值为负数或测定假阳性率大大增加等等。这主要是没有正确地理解和使用酶标仪所致。至于如何正确理解和使用酶标仪详见后面有关章节。此处，只是强调下面两点：1、比色
发布时间：2022-10-20 16:31
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冻存细胞其操作步骤
原代分离细胞培养是指从供体内取出组织后，经机械以及消化分离成单个细胞或单一型细胞群，使之在体外模拟人体生理环境，在无菌、适当温度和一定的营养条件下，生存、生长和繁殖。原代培养细胞常有不同的细胞成分，生长缓慢，但是更能代表所来源的组织细胞类型和表达组织的特异性特征。利用原代细胞培养做各种实验，如药wu测试、细胞分化及病毒学方面的试验效果很好。冻存细胞其操作步骤如下：1、选对数增生期细胞(证明无支原体
发布时间：2022-10-11 15:40
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血清的主要成分及存在的问题
血清的主要成分:血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激su、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。对血清的成分和作用的研究虽有很大进展，但仍存在一些问题。主要是：1、血清的成份可能有几
发布时间：2022-09-28 13:16
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提高 RT-PCR 反应的灵敏度与特异性方法
提高RT-PCR反应的灵敏度与特异性方法：①确定模板RNA 完整性好，无DNA 污染。② RNA模板中不应含有扩增反应抑制剂。③ 使用适量的模板RNA ，模板量太多会降低特异性，太少会导致扩增不出条带或条带太弱。④ 若模板中有二级结构，可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果。
发布时间：2022-09-16 16:58
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