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人结肠组织细胞操作要点小结
人结肠组织细胞操作要点：1、将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。2、将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过zui易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝
发布时间：2023-05-30 10:23
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qPCR 实验Ct 值偏大或普通 PCR 产量低分析
逆转录后的qPCR实验Ct值偏大或者普通PCR产量低。1、RNA 模板质量差，需要重新制备RNA 模板，可通过琼脂糖凝胶电泳检测质量。2、 逆转录后的 cDNA 中含有高浓度的模板RNA 和逆转录试剂成分，可能会对后续的PCR 产生抑制作用，所以可以适当梯度提高cDNA 稀释比例（通常来说可将cDNA原液稀释5-10倍，其zui佳模板加入量以扩增得到的Ct值在20-30个循环为好）。3、 起始的R
发布时间：2023-05-25 11:36
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细胞各形态分述
根据细胞是否贴附于支持物上生长，形态有所不同。呈悬浮生长时，不论细胞原来源于体内何种类型细胞．由于生长在液体环境中，胞体基本呈圆形。大多数细胞是贴附型生长的。当细胞贴附在支持物上后，细胞分化现象常变得不显著，易失去它们在体内时的原有特征．在形态上表现单一化的现象。贴附于支持物表面后，开始仍为圆形，但为时很短，很快便经过形态演变过渡成扁平形态。1．成纤维细胞型：此细胞形态与体内成纤维细胞的相似而得名
发布时间：2023-05-18 11:34
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ELISA试剂盒检测样本血清应用注意事项
大部分elisa检测均以血清为标本。血清标本可按惯例方法收集，应留意防止溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为符号的ELISA测定中，溶血标本可能会添加非特异性显色。血清标本宜在新鲜时检测。如有xi 菌污染，?菌体中可能含有内源性HRP，也会发生假阳性反应。 一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃。超越一周测定的需-20℃保存。冻住血清融解后，蛋白质局部浓缩，散
发布时间：2023-05-09 11:39
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ELISA移液技术注意要点
ELISA移液技术注意要点如下：1.移液时，枪头应对准孔，避免接触孔壁及底部。2.移液后轻轻晃动混匀试剂。3.如果您的样品具有黏性，请预先润洗枪头以消除表面张力的影响。吸液时等待片刻使体积平衡后再取出。4.移液不充分或移液体积不均，说明移液器需要校正。必要时请检查移液器并重新校正。5.加样时，不同的试剂标准品和样本间都要确保更换枪头，避免交叉污染。6.确保使用合适的枪头。不合适的枪头无法正确量取吸
发布时间：2023-05-06 13:31
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PCR反应引物纯化的几种方式选择
PCR反应引物纯化的几种方式选择：1、脱盐寡核苷酸合成后，为了纯化寡核苷酸成为天然的DNA结构，首先必须去除保护基团。通过浓氨水处理，合成的寡核苷酸从固相载体上分离，2-氰乙氧基--磷酸二脂键的保护基团，以及碱基的保护基团基（苯甲酰基和异丁基）被去除，从而形成了天然的DNA结构。然而，必要的去保护步骤完成后，寡核苷酸混合物还包含几种必须被去除的小分子有机化合物。所有非必须有机化合物被移除的过程通常
发布时间：2023-04-25 11:12
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PCR循环参数解析
循环参数:1.预变性模板DNA完全变性与PCR酶的完全激活对PCR能否成功至关重要，建议加热时间参考试剂说明书，一般未修饰的Taq酶激活时间为两分钟。2.变性步骤循环中一般95℃，30秒足以使各种靶DNA序列完全变性，可能的情况下可缩短该步骤时间。变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不彻底，易造成扩增失败。3.引物退火退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的Tm值为参考，根据扩增的长度适当下调
发布时间：2023-03-22 11:11
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体内DNA复制和体外PCR扩增DNA不同点
不同点1、条件不同体内DNA复制：以DNA双链、细胞分裂环境为条件。体外PCR扩增DNA：以模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件。2、过程不同体内DNA复制：是DNA双链在细胞分裂以前的分裂间期S期进行复制，包括引发、延伸、终止的过程。体外PCR扩增DNA：是将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经高温变性、低温退火、引物延伸等多次循环过程。
发布时间：2023-03-07 13:26
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PCR反应阴性对照出现明显扩增分析
PCR反应阴性对照出现明显扩增1、 反应体系组分（如水）被污染：实验过程中，更换新的Mix或者水重复实验。2、 标本间的交叉污染或产物污染：反应体系在超净工作台内配制，对实验室进行严格的区分，减少气溶胶污染；使用带滤芯的枪头。3、 引物二聚体的出现：引物设计不够优化：应避免引物二聚体和发夹结构的出现。4、引物浓度不佳：适当降低引物的浓度，并注意上下游引物的浓度配比。在35循环后阴性对照出现扩增属正
发布时间：2023-03-01 15:44
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PCR的两步法和三步法不同点
1、步骤不同：两步法退火和延伸同时在60℃-65℃间进行，以减少一次升降温过程，而三步法则分两次完成。2、用时不同：两步法减少一次升降温过程，提高了反应速度，用时较短。而三步法则比两步法用时更长。3、适用条件不同：两步法中，PCR扩增区很短，即使Taq酶活性不是zui佳也能在很短的时间内复制完成。三步法的PCR扩增区则较长，需要降低系统温度，引物与DNA模板结合，形成局部双链。
发布时间：2023-02-13 16:40
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ELISA试验洗板机洗板洗涤次数把控
洗板机洗板人为因素少，速度快，条件恒定，使用洗板机洗板时应特别注意洗涤次数关键点。1、影响洗涤效果的主要参数是洗涤循环的量。当然，洗涤次数越多，背景越低。然而，太多次的洗涤会降低信号强度，使其难以测定。通常的做法是在每次抗体或抗原孵育后重复洗涤三次。不过，一般而言，包被平板需要的洗涤次数比用户包被的平板要少。对于用户包被的ELISA板，必须优化洗涤次数。
发布时间：2023-01-30 14:32
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PCR反应过程防止污染的方法
PCR反应过程防止污染的方法：1、合理分隔实验室:将样品的处理、配制PCR反应液、PCR循环扩增及PCR产物的鉴定等步骤分区或分室进行，特别注意样本处理及PCR产物的鉴定应与其它步骤严格分开。zui好能划分①标本处理区;②PCR反应液制备区;③PCR循环扩增区;④PCR产物鉴定区。其实验用品及吸样枪应专用，实验前应将实验室用紫外线消du以破坏残留的DNA或RNA。2、吸样枪:吸样枪污染是一个值得注
发布时间：2023-01-17 13:26
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PCR退火(复性)温度与时间
退火(复性)温度与时间：退火温度是影响PCR特异性的较重要因素。变性后温度快速冷却至40℃～60℃，可使引物和模板发生结合。由于模板DNA比引物复杂得多，引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞。退火温度与时间，取决于引物的长度、碱基组成及其浓度，还有靶基序列的长度。对于20个核苷酸，G+C含量约50%的引物，55℃为选择zui适退火温度的起点较为理想。引物的复性温度可通过以下公式
发布时间：2023-01-05 16:10
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小鼠ELISA试剂盒移液器的使用方法
小鼠ELISA试剂盒移液器的使用技巧： 1、设定移液体积：从小量程调节至大量程时，应先调至超过设定体积刻度，再回调至设定体积，这样可以保证移液器的精que度； 2、装配枪头：将移液枪垂直插入吸头，左右旋转半圈，上紧即可； 3、吸液和放液：吸头浸入液面3mm以下，吸液前枪头先在液体中预润洗2-3次确保移液的精度和准度，慢吸慢放，以防突然松开溶液吸入过快而冲入取液器内腐蚀柱塞而造成漏气； 4、吸有液体
发布时间：2022-11-24 13:04
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从外观辨别胎牛血清方法
从外观辨别胎牛血清方法如下：1、颜色根据血红蛋白含量的不同，胎牛血清可表现出黄色或红色，我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl，实际上，血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响，这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度，良好的操作能降低血清的溶血。国产血清的采血点很分散，大多是由屠户采血后马上离心收集，所以很少会有溶血，表现出明亮的蜡黄色，当然，国产血清也很少有标准意义上的胎牛血清。进
发布时间：2022-11-15 10:40
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