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冻存原代细胞的培养
冻存原代细胞的培养：1.将一管细胞从液氮罐中取出，注意保护手和眼睛。2.将冻存管快速的放入37℃水浴中，轻轻握住并旋转，直到管内物体完全融化。3.将冻存管立即从水浴中拿出，擦干，转入无菌环境。4.用70％的酒精冲洗冻存管，然后擦去多余酒精。5.打开盖子，注意手指不要碰到里面的螺纹（注意，由于冻存管有负压，开盖时可能会有少量溢出，这是正常现象）。6.用多聚赖氨酸包被培养瓶。多数细胞推荐的接种密度为每
发布时间：2023-08-29 10:49
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细胞冻存和复苏的时间把控
细胞冻存和复苏的时间把控：细胞在体外生长期间，通常分为三个阶段：潜伏期、指数生长期和平台期。潜伏期通常是细胞刚刚传代，此时细胞开始贴附基质和伸展骨架，代谢活动集中在粘附蛋白和骨架蛋白的表达，细胞数量在这段时间内几乎没有增加。随后，细胞开始指数生长期，转录翻译过程旺盛，胞内物质、信号传递迅速，细胞数量迅速增长。如果在这个时期冻存，实际上是强行将细胞冻结在代谢的某一时刻，势必造成对解旋的DNA、转录翻
发布时间：2023-08-16 13:34
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ELISA试剂盒保存条件
ELISA试剂盒保存条件：1、有效期内的试剂如开封后未用完，请2-8°C保存。2、过期的试剂请不要用，打开后的试剂2-8°C保存。3、酶标包被板必须2-8°C保存，如有未用完的酶标包被板，打开的铝箔袋须密封并2-8°C保存。4、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
发布时间：2023-08-02 14:24
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引物纯度和稳定性分析
引物纯度和稳定性分析如下： 定制引物的标准纯度对于大多数PCR应用是足够的。因脱盐而除去的苯甲酰基和异丁酰基很少，因此不会干扰PCR。部分应用需要纯化，以除去在合成过程中的任何非全长序列。这些截断序列的产生是因为DNA合成化学的效率不是100％。这是个循环过程，在每个碱基加入时使用重复化学反应，使DNA从3'到5'合成。在任何一个循环都可能失败。较长的引物，尤其是大于50个碱基，截断序列的比例很大
发布时间：2023-07-27 12:00
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实时荧光定量PCR原理简述
实时荧光定量PCR所使用的荧光物质可分为两种：荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下：1.TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可
发布时间：2023-07-20 13:03
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荧光核酸试剂样品处理方法
aqMan探针是一种寡核苷酸探针，它的荧光与目的序列的扩增相关。它与目标序列上游引物和下游引物之间的序列配对。荧光基团连接在探针的5’末端，而淬灭剂则在3’末端。当完整的探针与目标序列配对时，荧光基团发射的荧光因与3’端的淬灭剂接近而被淬灭。但在进行延伸反应时，聚合酶的5’外切酶活性将探针进行酶切，使得荧光基团与淬灭剂分离。随着扩增循环数的增加，释放出来的荧光基团不断积累。因此荧光强度与扩增产
发布时间：2023-07-13 14:53
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人T细胞受体（TCR）ELISA试剂盒实验前准备事项小结
人T细胞受体（TCR）ELISA试剂盒实验前准备事项小结：做好准备工作正式开始时就可以降低问题的产生，避免出现手忙脚乱的情况，总结进行ELISA试剂盒实验前需要做那些准备工作如下：一、各种实验仪器及材料，如微量移液器，吸头，医用蒸馏水等。二、提醒您应将盒内各试剂取出，室温放置至少30分钟。三、应用样品稀释液来稀释样品，按照1：100的体积比来稀释样品如10μl的样品加入到1ml的应用样品稀释液中，
发布时间：2023-07-03 16:18
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ELISA实验各项条件设置优化
在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:1、固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。2、包被抗体(或抗原)的选择：将抗体(或抗原)吸附在
发布时间：2023-06-12 14:51
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人结肠组织细胞操作要点小结
人结肠组织细胞操作要点：1、将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。2、将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过zui易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝
发布时间：2023-05-30 10:23
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qPCR 实验Ct 值偏大或普通 PCR 产量低分析
逆转录后的qPCR实验Ct值偏大或者普通PCR产量低。1、RNA 模板质量差，需要重新制备RNA 模板，可通过琼脂糖凝胶电泳检测质量。2、 逆转录后的 cDNA 中含有高浓度的模板RNA 和逆转录试剂成分，可能会对后续的PCR 产生抑制作用，所以可以适当梯度提高cDNA 稀释比例（通常来说可将cDNA原液稀释5-10倍，其zui佳模板加入量以扩增得到的Ct值在20-30个循环为好）。3、 起始的R
发布时间：2023-05-25 11:36
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细胞各形态分述
根据细胞是否贴附于支持物上生长，形态有所不同。呈悬浮生长时，不论细胞原来源于体内何种类型细胞．由于生长在液体环境中，胞体基本呈圆形。大多数细胞是贴附型生长的。当细胞贴附在支持物上后，细胞分化现象常变得不显著，易失去它们在体内时的原有特征．在形态上表现单一化的现象。贴附于支持物表面后，开始仍为圆形，但为时很短，很快便经过形态演变过渡成扁平形态。1．成纤维细胞型：此细胞形态与体内成纤维细胞的相似而得名
发布时间：2023-05-18 11:34
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ELISA试剂盒检测样本血清应用注意事项
大部分elisa检测均以血清为标本。血清标本可按惯例方法收集，应留意防止溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为符号的ELISA测定中，溶血标本可能会添加非特异性显色。血清标本宜在新鲜时检测。如有xi 菌污染，?菌体中可能含有内源性HRP，也会发生假阳性反应。 一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃。超越一周测定的需-20℃保存。冻住血清融解后，蛋白质局部浓缩，散
发布时间：2023-05-09 11:39
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ELISA移液技术注意要点
ELISA移液技术注意要点如下：1.移液时，枪头应对准孔，避免接触孔壁及底部。2.移液后轻轻晃动混匀试剂。3.如果您的样品具有黏性，请预先润洗枪头以消除表面张力的影响。吸液时等待片刻使体积平衡后再取出。4.移液不充分或移液体积不均，说明移液器需要校正。必要时请检查移液器并重新校正。5.加样时，不同的试剂标准品和样本间都要确保更换枪头，避免交叉污染。6.确保使用合适的枪头。不合适的枪头无法正确量取吸
发布时间：2023-05-06 13:31
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PCR反应引物纯化的几种方式选择
PCR反应引物纯化的几种方式选择：1、脱盐寡核苷酸合成后，为了纯化寡核苷酸成为天然的DNA结构，首先必须去除保护基团。通过浓氨水处理，合成的寡核苷酸从固相载体上分离，2-氰乙氧基--磷酸二脂键的保护基团，以及碱基的保护基团基（苯甲酰基和异丁基）被去除，从而形成了天然的DNA结构。然而，必要的去保护步骤完成后，寡核苷酸混合物还包含几种必须被去除的小分子有机化合物。所有非必须有机化合物被移除的过程通常
发布时间：2023-04-25 11:12
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PCR循环参数解析
循环参数:1.预变性模板DNA完全变性与PCR酶的完全激活对PCR能否成功至关重要，建议加热时间参考试剂说明书，一般未修饰的Taq酶激活时间为两分钟。2.变性步骤循环中一般95℃，30秒足以使各种靶DNA序列完全变性，可能的情况下可缩短该步骤时间。变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不彻底，易造成扩增失败。3.引物退火退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的Tm值为参考，根据扩增的长度适当下调
发布时间：2023-03-22 11:11
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