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PCR反应条件的选择技巧
PCR反应条件的选择技巧主要体现在温度、时间和循环次数上，温度过高，延伸时间不够都会对实验结果有很大的影响。PCR反应条件三要素为温度、时间和循环次数。温度与时间的设置基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点。在标准反应中采用三温度点法，双链DNA在90～95℃变性，再迅速冷却至40～60℃，引物退火并结合到靶序列上，然后快速升温至70～75℃，在TaqDNA 聚合酶的作用下，使引
发布时间：2024-08-16 13:43
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ELISA检测试剂盒实验加样流程
ELISA检测试剂盒实验加样流程：1、标本为血清：将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟;若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。2、加样后及时放入孵箱。 3、加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。4、如果采用
发布时间：2024-08-13 10:38
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细胞复苏过程
细胞复苏是指将冻存在液氮里边或者-80℃冰箱中的细胞解冻，再培养传代。细胞复苏应采用快速融化的方法，这样的目的是为了让细胞外结晶在很短的时间内融化，从而避免慢悠悠的融化，使得水分渗入细胞内再结晶，从而对细胞再次造成伤害，从而影响细胞的存活率。细胞复苏：1：细胞是冻在-80℃的环境里面的，所以拿出来后，应该尽快去37℃水浴锅里解冻（我一般是放在PE手套里面，然后在37摄氏度的水域上快速融化。
发布时间：2024-08-06 10:12
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细胞适应无血清培养基的方法
细胞适应无血清培养基的方法： 1.直接适应——细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基（SFM）中。 一些类型细胞可直接从包含血清的培养基适应无血清培养基。对于直接适应，接种细胞密度应该:2.5×105~3.5×105细胞/ml。当细胞密度达到1×106~3×106细胞/ml时，传代培养细胞。当细胞密度在培养4到7天后达到2×106~4×106细胞/ml时，细胞wan全适应了无血清培养基
发布时间：2024-07-29 16:58
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ELISA试验温育的时间及温度选择
在ELISA中一般有两次抗原抗体反应，即加酶结合物和显色剂后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育(incubation)，有人称之为孵育。温育的时间选择：温育这一步是ELISA测定中容易出现问题的步骤。目前国内ELISA试剂盒的反应温育时间为37℃30分钟-1小时，进口ELISA试剂盒则通常为37℃1-2小时才能有较完全的结合，低于1小时，可能会影响测定下限。ELISA
发布时间：2024-07-22 16:46
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PCR产物纯化效率提升方法
PCR扩增完成后需要进行琼脂糖凝胶电泳检测，在条带单一无其他杂带的情况下，可以直接对产物进行纯化。提升PCR产物纯化效率提升方法如下：1.模板纯度，有较多蛋白或其他杂质时，会一定程度影响pcr效率；2.模板量，过高的模板量反而会降低pcr效率特异性；3.引物，引物的长度xu要再效率和特异性间获得优化，其次要控制引物gc含量；4.聚合酶，要考虑酶的保真率和速度；5.mg离子浓度，mg离子浓度过高会降
发布时间：2024-07-18 14:54
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细胞培养实验基本操作步骤
细胞培养实验基本操作步骤：1、进无菌室前要洗手，按规定穿隔离衣。开始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。2、操作者动作要轻，安装吸管帽、打开或封闭瓶口等操作应在火焰近处并经过烧灼进行。但要注意，金属器械不能在火焰中长时间烧灼，以防退火；烧过的器械要冷却后才能使用；已吸过培养液的吸管不能再用火焰烧灼，因残留在吸管内的培养液成分如蛋白质等烧焦后会产生有害物质，吸管再用时会将其带到培养液中；
发布时间：2024-07-09 14:19
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碱性磷酸酶(AKP/ALP)试剂盒操作步骤
碱性磷酸酶(AKP/ALP)试剂盒操作步骤:1.样品的准备：a.细胞样品的准备：收集细胞，用4℃或冰浴预冷的PBS或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4℃或冰浴匀浆(可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器)。随后匀浆液4℃离心，取上清作为待测样品。
发布时间：2024-07-02 10:17
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标准品的稳定性与保存
为保证检测的连续可比性，每批标准品应有相当大的量，以保证能在较长时间内使用。因此，每批标准品应在适当的条件下保存，使其**活性和浓度保持稳定。1、影响标准品稳定的因素（1）基质中的酶、**污染、pH的变化、氧化、潮湿等因素都可以导致标准品的变性，而且这些变化可因高温和光照加速。（2）在保存过程中发生聚合反应等分子结构的变化，可使标准品失活。（3）容器内壁的吸附作用和溶剂的蒸发可造成标准品浓
发布时间：2024-06-25 11:08
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RM细胞培养的优势特点
细胞培养是指将细胞从动物或植物体内取出，然后在适宜的人工环境中生长的过程。细胞可以在培养前直接从组织中取出并通过酶或机械方法进行解离，也可以来源于已建立的细胞系或细胞株。RM细胞培养的优势特点有以下几点：1.研究的对象是活细胞在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。2.研究条件可以人为控制pH、温度、
发布时间：2024-06-18 14:43
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抗体的五种亚型结构概述
在人体内，抗体可以分为IgG、IgM、IgA、IgD和IgE五种亚型，这五种抗体的基本结构类型相似，都是由4条多肽链构成，相互之间主要的差异点是重链（因此本小结也是对抗体Fc片段结构的描写）的结构不同，五种抗体亚型的重链对应的分别为γ、μ、α、δ和ε链。IgGIgG是人体内主要的抗体类型，也是目前在功能和结构上，被为广泛了解的类型。IgG的轻链存在两种形式：kappa(k)和lambda(λ).在
发布时间：2024-06-05 13:20
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紧密着色霉PCR检测试剂盒实验步骤
紧密着色霉PCR检测试剂盒实验步骤：1、产品仅用于科研取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。2、两相分离每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是
发布时间：2024-05-28 10:41
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原代细胞培养过程
原代细胞是从生物体内直接分离并在体外培养的细胞。它们保持了从其来源组织或器官中获取的特异性和生物学真实性。原代细胞通常具有有限的寿命，因为它们在培养中会逐渐老化并终死亡。原代细胞的培养条件：一、静置贴壁细胞(包括半贴壁细胞的培养)培养1、细胞要通过充分漂洗，以尽量除去消化液的毒性；2、细胞接种时浓度要稍大一些，至少为5×108细胞/L；3、培养基可用Eagle(MEMCorning10-010-C
发布时间：2024-05-20 11:12
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防止PCR反应污染的方法
防止PCR反应污染的方法：1、合理分隔实验室:将样品的处理、配制PCR反应液、PCR循环扩增及PCR产物的鉴定等步骤分区或分室进行，特别注意样本处理及PCR产物的鉴定应与其它步骤严格分开。好能划分①标本处理区;②PCR反应液制备区;③PCR循环扩增区;④PCR产物鉴定区。其实验用品及吸样枪应专用，实验前应将实验室用紫外线**以破坏残留的DNA或RNA。2、吸样枪:吸样枪污染是一个值得注意的问题。由
发布时间：2024-05-13 10:59
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PCR检测试剂盒引物原则
PCR反应产物的特异性由一对上下游引物所决定。引物的好坏往往是PCR成败的关键。引物设计和选择目的DNA序列区域时可遵循下列原则：1、引物长度约为16-30bp，太短会降低退火温度影响引物与模板配对，从而使非特异性增高。太长则比较浪费，且难以合成。2、引物中G+C含量通常为40%-60%，可按下式粗略估计引物的解链温度Tm＝4(G+C)+2(A+T)。3、四种碱基应随机分布，在3'端不存在连续3个
发布时间：2024-05-06 11:02
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