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PCR反应主要成份Taq DNA聚合酶分析
一般TaqDNA聚合酶活性半衰期为92.5℃130min，95℃40min，97℃5min。现在人们又发现许多新的耐热的DNA聚合酶，这些酶的活性在高温下活性可维持更长时间。TaqDNA聚合酶的酶活性单位定义为74℃下，30min，掺入10nmol/LdNTP到核酸中所需的酶量。TaqDNA聚合酶的一个致命弱点是它的出错率，一般PCR中出错率为2×10-4核苷酸/每轮循环，在利用PCR克隆和进行序
发布时间：2024-08-29 16:53
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RT-LAMP检测试剂盒试验使用方法
RT-LAMP检测试剂盒试验使用方法:一、稀释标准曲线样品（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。1.标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。2.用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。3.在7号管中加入5μL阳性对照（浓度为1×10E8拷贝/
发布时间：2024-08-15 15:34
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防血清挥发的方法
防发挥的方法 1、使用前：必须灭活处理，56℃30分钟。对于一些品质高的胎牛血清和新牛血清可以考虑不经灭活直接用于细胞培养。 2、储存条件：一般储存于－20℃，同时应避免反复冻融。购买大包装的血清后，首先要灭活处理，然后分装成小包装，储存于－20℃，使用前融化。融化时现置于4℃。融化后的血清在4℃不宜长时间存放，应尽快使用。 3、使用浓度：自从有了合成培养基，血清就是作为一种添加成分与合成培
发布时间：2024-08-08 10:21
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小鼠8异前列腺素ELISA试剂盒操作步骤
操作步骤:1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。4.
发布时间：2024-07-24 09:58
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细胞稳转株构建病毒法步骤
细胞稳转株构建病毒法步骤：1、确定目标细胞系的相关信息，细胞的培养条件，细胞的增值速度，支原体污染情况；2、预实验确定MOI值，可通过查阅文献确定慢病毒在目标细胞系中的MOI值也可参考查阅得到的数据，设计梯度实验，摸索合适MOI；3、预实验确定筛选**用量，常用的**筛选有：puro、G418、潮霉素等；4、细胞铺板，将需要的细胞量接种于合适的培养皿中；5、细胞感染，通过接种的细胞量及预实验得来的
发布时间：2024-07-16 16:27
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ELISA试剂盒鉴定方法详述
鉴别方法：Ⅰ：利用干扰实验即可辨别elisa试剂盒是否检测目的抗原，方法如下：1、将针对试剂盒特异性的重组蛋白抗原和试剂盒中的检测抗体配置成antibody:antigen≈1:2的混合孵育液。2、37℃孵育15分钟后，代替原试剂盒中的检测抗体3、后续操作按照试剂盒说明书进行，加检测抗体、酶复合物和底物4、实验完毕后，检测其标准曲线，如果标准曲线良好则说明加入的目的抗原和试剂盒抗体不匹配，试剂盒检
发布时间：2024-07-10 14:29
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ELISA实验显色淡结果分析
ELISA（酶联**吸附试验）是一种用于检测抗原或抗体浓度的**学试验。如果ELISA实验的显色淡或灵敏度低，可能有多种原因。ELISA实验显色淡的原因及解决方案： 原因一：试剂盒在运输途中时间太长，温度太高。 解决方案：尽量缩短运输时间，夏季应放冰块降温。 原因二：试剂盒未充分平衡。 解决方案：试剂盒从2～8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平衡至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温（约25℃
发布时间：2024-06-24 16:00
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血清的保存注意事项
血清的保存注意事项：1、需要长期保存的血清必须储存于-20℃-70℃低温冰箱中.4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月.由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂.2、热灭活是指56℃,30分钟加热已完全解冻的血清.加热过程中须规则摇晃均匀.此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活.除非必须,一般不建议作此热处理,
发布时间：2024-06-17 11:10
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胎牛血清挑选标准
胎牛血清挑选标准:1.看产地不同产地的胎牛血清，品质也是相差甚远。值得注意的是，胎牛血清是动物源生物制品，我国对于动物源制品的进口一直有很严格的规定，目前我国批准进口的胎牛血清来源是澳大利亚、新西兰和乌拉圭（划重点！），合法正规途径进口的胎牛血清必须在产品包装上标注血源地。这意味着，其他血源地的胎牛血清在我国是不允许进口的，在选购进口产品时，要规避选取来源为禁止输入国家的相关产品。 2.看资质合法
发布时间：2024-06-03 14:37
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细胞复苏与冻存
1、细胞复苏：①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间min左右，加入4-5ml培养基混匀。②在000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。2、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种1、弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗-2次，加入mL0.25%（T25瓶）2、-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，
发布时间：2024-05-23 11:38
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细胞冻存原理
当细胞所处温度低于0°C时，细胞脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶，冰晶的大小对细胞的影响是不同的，大冰晶容易造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂，故造成复苏出来的细胞存活率、状态等与冻存前的状态相差甚远。因此，我们在冻存细胞的时候会采取两个措施，一加入低温保护剂，二慢冻细胞。冻存时机：细胞应在生长良好、密度约为80-90％、数目一般为106-107/ml，活力差的细胞在冻存后的成活率很
发布时间：2024-05-14 16:10
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抗体稳定性良好理由小结
抗体稳定性良好理由小结：1.抗体的稳定性是自然界长期进化的结果抗体是**系统中重要的分子之一，其稳定性是自然进化筛选的结果。在众多物种中，抗体分子形成了保守而稳定的结构，分子中70%氨基酸残基(**球蛋白结构域)以bet**层(beta-sheet)形式堆叠，形成紧密并能耐受蛋白酶作用的“三明治”结构，轻链和重链通过保守的二硫键形成具有三个结构域的**球蛋白，大大提高了分子本身的稳定性。2.抗体浓
发布时间：2024-05-09 10:17
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Elisa测定实操要点总汇
Elisa方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定.在Elisa测定中影响因素较多,在检测过程中除正常反应外,有时常见到一些错误的结果。1．样品稀释一般产品的样品稀释倍数均通过大量试验确定,以保证试验的灵敏度和特异性.酶联**反应是一种敏感性很高的反应,如果血清不稀释,不可避免会产生很强的非特异性反应,出现假阳性.2．试剂盒平衡Elisa中所有试剂和板条均应在试验前平衡至室温(约25℃),一般需在室温放
发布时间：2024-04-26 10:26
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小鼠ELISA试剂盒双抗体夹心法流程
小鼠ELISA试剂盒双抗体夹心法流程:1、用缓冲液将抗体稀释至1-1a0ug/ml。在反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次。2、加样：加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。3、
发布时间：2024-04-11 11:16
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PCR反应温度循环参数
PCR反应温度循环参数：1．变性温度与时间PCR反应中模板DNA的变性十分重要。只有完全性的模板DNA和PCR产物双链完全解开，才能有效的和引物结合。这种结合是PCR扩增的基础。变性温度越高，时间越长变性就越充分。但温度过高、时间过长又会影响TaqDNA聚合酶的活性，所以通常选用变性温度为95℃30s为宜。在PCR反应中第2个循环变性重要，需时间较长，因模板DNA的链比较长。2．复性温度与时间变性
发布时间：2024-03-29 16:46
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